O ponto de partida. Cada afirmação junta uma etapa do protocolo e uma justificação para ela. A etapa está sempre certa (é do protocolo); o que se testa é se a justificação é a correta. A fonte para decidir está no texto introdutório do Grupo II, que diz para que serve cada reagente – lê-o como uma «tabela» de funções:
- rompimento mecânico → «pressão exercida sobre o material biológico»;
- detergente → «para completar a lise celular»;
- sal (NaCl) → os catiões «neutralizam as cargas negativas das moléculas de DNA, o que permite a sua visualização»;
- proteases → «enzimas hidrolíticas»;
- etanol a frio → «o DNA é insolúvel neste solvente».
Depois, compara cada afirmação com esta tabela.
1.º — o que acontece numa extração de DNA
Para perceberes os passos, pensa no que está entre ti e o DNA. Numa célula vegetal (a fruta), o DNA está dentro do núcleo, que está dentro da célula, rodeada de membrana plasmática e de parede celular. E o DNA não está «nu»: está enrolado em proteínas, as histonas, formando a cromatina. Cada etapa do protocolo remove um destes obstáculos:
- a maceração rompe as paredes e as células;
- o detergente dissolve os lípidos das membranas (plasmática e nuclear) – é a lise;
- as proteases degradam as proteínas;
- o sal e o etanol fazem o DNA sair da solução e tornar-se visível.
2.º — afirmação II – verdadeira
«O etanol frio é essencial, pois permite a separação do DNA da solução aquosa.» O texto diz que se usa «etanol a frio, uma vez que o DNA é insolúvel neste solvente». Na fase aquosa, o DNA está dissolvido, invisível. Quando contacta com o etanol, deixa de estar em solução: precipita e separa-se da solução aquosa, formando os filamentos esbranquiçados que se veem na Figura 2, na fase alcoólica. O etanol é usado frio porque a baixa temperatura favorece essa precipitação. Verdadeira.
3.º — afirmação III – verdadeira
«A utilização de NaCl possibilita a agregação das moléculas de DNA.» O DNA tem cargas negativas, nos grupos fosfato do seu esqueleto. Enquanto estão carregadas, as moléculas de DNA repelem-se umas às outras (cargas iguais repelem-se) e ficam dispersas. Os catiões Na+ do sal ligam-se a essas cargas e neutralizam-nas: as moléculas deixam de se repelir e podem agregar-se. É essa agregação que, com o etanol, forma filamentos visíveis a olho nu – é o que o texto quer dizer com «permite a sua visualização». Verdadeira.
4.º — afirmação V – verdadeira
«A trituração da fruta permite a rutura mecânica das paredes celulares, ajudando a libertar o DNA.» O texto diz que «o rompimento mecânico ocorre por meio da pressão exercida sobre o material biológico» – é o que se faz ao macerar a fruta no almofariz. As células vegetais têm uma parede celular rígida, de celulose, que o detergente não dissolve; é preciso rompê-la mecanicamente. Ao triturar, rompe-se a parede, as células abrem-se e o conteúdo celular, incluindo o DNA, é libertado. Verdadeira.
Resposta: II, III e V.
porque é que I e IV são falsas
- I – «A utilização de detergente contribui para desnaturar as proteínas, libertando o DNA.» Falsa. O texto atribui ao detergente outra função: «completar a lise celular». O detergente atua sobre os lípidos das membranas (plasmática e nuclear), desorganizando-as, como faz à gordura de um prato – é isso que liberta o DNA. No protocolo, quem trata das proteínas são as proteases, que as hidrolisam. (Alguns detergentes também podem alterar proteínas, mas não é essa a justificação desta etapa, nem é assim que o DNA é libertado.) É tentadora porque mistura duas etapas verdadeiras numa só justificação.
- IV – «A separação dos filamentos de DNA resulta da sua maior densidade relativamente à fase alcoólica.» Falsa. Olha para a Figura 2: os filamentos de DNA estão no topo da fase alcoólica, junto à superfície. Se fossem mais densos do que ela, afundavam e iam parar à interface ou ao fundo. A separação resulta da insolubilidade do DNA no etanol (afirmação II), não da densidade. A densidade explica outra coisa: o etanol fica por cima da fase aquosa por ser menos denso do que ela.
onde se perdem pontos
Item de seleção e facultativo, 8 pontos, classificado de forma dicotómica: só a identificação das três afirmações corretas vale os 8 pontos; conta para a nota se ficar entre os quatro melhores dos oito itens facultativos.
- Aceitar a afirmação I por soar plausível. O detergente ataca lípidos (membranas); as proteínas são com as proteases. Confere sempre a função no texto.
- Não olhar para a Figura 2 na afirmação IV. A posição dos filamentos desmente-a.
- Confundir «insolúvel» com «mais denso». Uma substância insolúvel separa-se da solução, mas pode ficar a flutuar ou ir ao fundo; a posição depende da densidade, a separação depende da solubilidade.
- Escrever quatro números «por segurança». O enunciado pede três, e a classificação é tudo ou nada.
a regra a fixar
Na extração de DNA, cada passo tem um alvo: maceração → paredes celulares (rutura mecânica); detergente → lípidos das membranas (lise); sal → cargas negativas do DNA (agregação); proteases → proteínas (histonas); etanol frio → o DNA é insolúvel e precipita. Num item de afirmações sobre um protocolo, a justificação certa é a que está no texto, não a que «soa bem».
